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小鼠白介素-1(IL-1)ELISA試劑盒簡(jiǎn)介

更新時(shí)間:2012-06-26  |  點(diǎn)擊率:2211

 本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗小鼠 IL-1 單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 IL-1與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗小鼠IL-1,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,后加終止液,在450nm處測(cè)OD值,IL-1濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中IL-1濃度。

試劑盒組成2-8保存)

 

酶標(biāo)板(Coated Wells

96

酶標(biāo)抗體工作液(Enzyme Conjugate

12ml

10×標(biāo)本稀釋液(Sample Buffer

12ml

20×濃縮洗滌液(Wash Buffer

50ml

標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):10ng/

2

底物工作液(TMB Solution

12ml

*抗體工作液(Biotinylated Antibody

12ml

終止液Stop Solution

12ml

 

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1.          收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8保存48小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20 -70 )保存,避免反復(fù)凍融。

2.          標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成10ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,*管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在*管中加入10ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。

3.          10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

4.         洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

檢測(cè)程序

1.          加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37120分鐘。

2.          洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。

3.          每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置3760分鐘。

4.          洗板:同前。

5.          每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置3730分鐘。

6.          洗板:同前。

7.          每孔加入底物工作液100ul,置37 暗處反應(yīng)15分鐘。

8.          每孔加入100ul終止液混勻。

9.          30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。

結(jié)果計(jì)算與判斷

1.          所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。

2.          以標(biāo)準(zhǔn)品1000500、250、125、62.531.2、15.6、0 pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.          根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)IL-1含量。

試劑盒性能

             1.   靈敏度小的IL-1 檢測(cè)濃度小于8pg/ml

2.        特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的小鼠IL-1。不與小鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3.        重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。

注意事項(xiàng)

             1.   以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

 2.   洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。

             3.   板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥

             4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

 5.   本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!

聯(lián)


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