Calcein, AM是一種可對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑，它穿透細胞膜進入細胞后被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成Calcein，從而被滯留在細胞內(nèi)，發(fā)出強綠色熒光。與其它同類試劑（如 BCECF, AM和CFDA）相比，Calcein, AM的細胞毒性很低。Calcein的激發(fā)和發(fā)射波長分別為 490 nm和515 nm。
      Calcein, AM僅對活細胞染色。作為核染色染料的PI 不能穿過活細胞的細胞膜，它穿過死細胞膜的無序區(qū)域而到達細胞核，并嵌入細胞的 DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光（激發(fā)：535 nm，發(fā)射：617 nm），因此 PI 僅對死細胞染色。由于 Calcein和PI-DNA 都可被490 nm激發(fā)，因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。用545 nm激發(fā)，僅可觀察到死細胞。根據(jù)以上特點，Calcein, AM和PI 經(jīng)常被結(jié)合用來作為活細胞和死細胞的雙重染色。 
      由于不同細胞系的最佳染色條件不同，我們建議個別確定Calcein, AM 和PI的合適濃度。  
操作說明：
     （1）用DMSO 制備1 mM 的Calcein, AM溶液，并用PBS 將其稀釋制成1～50μM的Calcein, AM溶液①。
     （2）將1/10 細胞培養(yǎng)基體積的Calcein, AM溶液加入到細胞培養(yǎng)基中②。
     （3）在37℃培養(yǎng)細胞15～30分鐘。 
     （4）用PBS 或適當?shù)木彌_液洗滌細胞兩次。 
     （5）用490 nm激發(fā)波長，515 nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。 
注意：

      如果Calcein, AM很難進入細胞，可以使用表面活性劑，如Pluronic F127 。 
      也可以用1/10 濃度的Calcein, AM溶液代替培養(yǎng)基。