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人CTGF定量EIA試劑盒使用說(shuō)明

更新時(shí)間:2009-12-23  |  點(diǎn)擊率:3233

 

CTGF定量EIA試劑盒使用說(shuō)明
原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-EIASA法。用抗人CTGF單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CTGF與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人CTGF,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入酶底物TMB,出現(xiàn)藍(lán)色,加終止液硫酸,顏色變黃,在450nm處測(cè)OD值,CTGF濃度與OD值成正比,可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的CTGF濃度。
試劑盒組成
1.   96孔微孔板:一塊,已包被抗人CTGF單抗。
2.   樣品稀釋液:一瓶
3.   *抗體工作液:一瓶
4.   酶標(biāo)抗體工作液:一瓶
5.   底物稀釋液:兩瓶
6.   終止液:一瓶
7.   洗滌液(20X):一瓶
8.   標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉,2000ng/ml ):一管
9.   坐標(biāo)紙:一張
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1.   洗滌液:用重蒸水120稀釋。
2.   收集血液標(biāo)本:采集血清或培養(yǎng)液盡早檢測(cè),2-8℃保存一天;需更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20℃)保存,避免反復(fù)凍融。
3.   標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前每管中加入100ul蒸餾水溶解后即可。
4.   底物工作液配制:使用前將OPD片放入底物稀釋液中溶解,每片加液5ml。
檢測(cè)程序
1.   建立標(biāo)準(zhǔn)曲線:設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔,每孔中各加入樣品稀釋液100ul,*孔加標(biāo)準(zhǔn)品100ul,混勻后用加樣器吸出100ul,移至第二孔。如此反復(fù)作倍比稀釋至第七孔,后,從第七孔中吸出100ul棄去,使之體積均為100ul。第八孔為空白對(duì)照。
2.   加樣:待測(cè)品孔每孔各加入待測(cè)樣品100ul。
3.   將反應(yīng)板充分混勻后置37 120分鐘。
4.   洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌46次,向?yàn)V紙上印干。
5.   除空白孔外,每孔中加入*抗體工作液50ul。
6.   將反應(yīng)板置37 60分鐘。
7.   洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌46次,向?yàn)V紙上印干。
8.   除空白孔外,每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。
9.   將反應(yīng)板置37 60分鐘。
10.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌46次,向?yàn)V紙上印干
11.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)515分鐘(視顏色深淺靈活掌握)。
12.每孔加入50ul終止液混勻。
13.450nm處測(cè)吸光值。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1.   所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。
2.   以標(biāo)準(zhǔn)品1000、500250、125、62、31.25、15.63、0ng/mlOD值在半對(duì)數(shù)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.   根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CTGF含量。
注意事項(xiàng)
1.   本試劑盒宜置-20℃冰箱保存。
2.   本試劑盒取出的試劑在室溫條件下使用,溶液應(yīng)輕輕搖勻后使用。
3.   本試劑盒含2M硫酸,不要將它與含疊氮鈉的廢物混在一起。
4.   板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。

聯(lián)


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