大多數中性蛋白酶是含鋅離子的金屬酶，相對分子質量為35000～40000，等電點為pH值8～9。是微生物蛋白酶中最不穩(wěn)定的酶，很易自溶，即使在低溫冰凍干燥，也會造成相對分子質量的明顯減少。
 

　　(一)一般性質
 

　　大多數微生物中性蛋白酶是金屬酶，一分子酶蛋白中含一原子鋅，分子質量35 000-40 000，等電點pH8～9，是微生物蛋白酶中最不穩(wěn)定的酶，很易自溶，即使在低溫冰凍干燥，也會造成分子質量的明顯減少。
 

　　代表性的中性蛋白酶是耐熱解蛋白芽孢桿菌所產生的熱解素與枯草桿菌的中性蛋白酶，這些酶在pH6～7穩(wěn)定，超出此范圍迅速失活。以酪蛋白為底物時，枯草桿菌蛋白酶最適pH為7～8，熱解素是7～9，曲霉菌的酶是pH 6.5～7.5。
 

　　一般中性蛋白酶的熱穩(wěn)定性較差，枯草桿菌中性蛋白酶在pH7，60*(2處理15min，失活90%;棲土曲霉3.942中性蛋白酶55℃處理10min，失活80%以上;而放線菌166中性蛋白酶的熱穩(wěn)定性更差，只在35℃以下穩(wěn)定，45。
 

　　C迅速失活。只有少數例外，如熱解素在80℃處理1h，尚存酶活50%;有的枯草桿菌中性蛋白酶，在pH7，65℃酶活幾乎無損失。酶的最適溫度，取決于反應時間，在反應時間lo～30rain內，最適溫度是45～50℃。鈣離子可以增加酶的穩(wěn)定性，并減少自溶。
 

　　(二)活性中心
 

　　酶的活性中心的鋅離子，起著酶同底物之間的橋梁作用。
 

　　有些酶的分子中尚含若干原子鈣(表5—16)。鈣具有穩(wěn)定構象的作用，還同酶的耐拭杜右擎若活性中心的鋅用EDTA去除后，用其他金屬置換，由不同金屬可得到活性不同的酶。
 

　　借助此法可改進蛋白酶的活性以制備高活性蛋白酶結晶，據認為高活性型的酶其活性中心含有鈣、鈷、銅、錳、鎳和鋅原子，如用鋇、鎘、鐵、鈉、鉛置換，則得到的蛋白酶無活性，結晶的鈣型酶，酶活性比普通的結晶高3倍以上。
 

　　以錳代替多黏芽孢桿菌中性蛋白酶活性中心的鋅，酶活提高56%，并提高了耐熱性。不少中性蛋白酶的氨基酸組成已經測定。
 

　　芽孢桿菌中性蛋白酶中，均不含半胱氨酸所構成的二硫鍵，有的還不含甲硫氨酸。對于氨基酸的順序尚不清楚?？莶輻U菌中性蛋白酶，酶分子中的2～3個酪氨酸和1個組氨酸殘基同鋅原子一起是表現酶的活性所不可少的，而一個色氨酸和幾個鈣原子在維持酶的構象上有重要作用。
 

　　短小芽孢桿菌中性蛋白酶，酶活性的表現除需要鋅外，尚需絲氨酸殘基。耐熱性的中性蛋白酶熱解素與枯草桿菌中性蛋白酶A，其活性中心氨基酸是一致的。
 

　　(三)專一性
 

　　中性蛋白酶的最小合成底物是Z—Gty—X—NH：，其中的X須是疏水性大分子氨基酸，若切開點肽鍵的羧基是由丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或組氨酸殘基所提供，則水解力增強。中性蛋白酶對于堿性蛋白酶的合成底物幾乎*沒有作用。
 

　　不少芽孢桿菌也生產堿性蛋白酶?？衫昧u基磷灰石吸附中性蛋白酶，而同堿性蛋白酶分開。由于中性蛋白酶優(yōu)先切開亮氨酸或苯丙氨酸構成的肽鍵，因此可以用呋喃基丙烯酰甘氨基乙酰亮氨酸酰胺(FAGLA，Furyl acryloyl glycyl leucine amide)為底物，用分光光度法作精確的測定。